《自然》雜志關(guān)于四川大學(xué)華西醫(yī)院盧鈾教授利用CRISPR技術(shù)編輯T細(xì)胞并回輸至病人體內(nèi)進(jìn)行腫瘤治療的報(bào)道想必大家都看到了進行培訓，驚嘆于盧鈾教授的勇氣與先見(jiàn)的同時(shí)成就，筆者發(fā)現(xiàn)zui近華西醫(yī)院還有一項(xiàng)CRISPR應(yīng)用研究也取得了新進(jìn)展便利性，來(lái)自華西生物治療國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室的魏于全院士課題組采用人工病毒進(jìn)行CRISPR-Cas9輸送橋梁作用，成功在小鼠腫瘤模型中完成了靶基因編輯多樣性，達(dá)到了較好的腫瘤治療效果堅實基礎，相關(guān)成果發(fā)表在《美國(guó)化學(xué)學(xué)會(huì)·納米》雜志上使命責任。

近日相貫通，來(lái)自四川大學(xué)華西生物治療國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室的魏于全院士課題組采用人工病毒進(jìn)行CRISPR-Cas9基因編輯系統(tǒng)輸送不斷發展，成功在小鼠腫瘤模型中完成了靶基因編輯，達(dá)到了較好的腫瘤治療效果自動化方案，相關(guān)成果發(fā)表在《美國(guó)化學(xué)學(xué)會(huì)·納米》雜志上緊密協作。

《自然》雜志關(guān)于四川大學(xué)華西醫(yī)院盧鈾教授利用CRISPR技術(shù)編輯T細(xì)胞并回輸至病人體內(nèi)進(jìn)行腫瘤治療的報(bào)道想必大家都看到了，驚嘆于盧鈾教授的勇氣與先見(jiàn)的同時(shí)線上線下，筆者發(fā)現(xiàn)zui近華西醫(yī)院還有一項(xiàng)CRISPR應(yīng)用研究也取得了新進(jìn)展發揮重要作用，來(lái)自華西生物治療國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室的魏于全院士課題組采用人工病毒進(jìn)行CRISPR-Cas9輸送，成功在小鼠腫瘤模型中完成了靶基因編輯數據顯示，達(dá)到了較好的腫瘤治療效果高質量，相關(guān)成果發(fā)表在《美國(guó)化學(xué)學(xué)會(huì)·納米》雜志上。

大家可能會(huì)說(shuō)記得牢，人體實(shí)驗(yàn)都已經(jīng)在進(jìn)行了註入了新的力量，小鼠實(shí)驗(yàn)似乎也不足為奇了吧？別忘了更多可能性，人體實(shí)驗(yàn)是進(jìn)行免疫細(xì)胞T細(xì)胞的體外編輯去創新，編輯完成后再回輸治療，但是功能強(qiáng)大的魔剪緊迫性，只用在體外編輯T細(xì)胞似乎有點(diǎn)大材小用結構，直接在體內(nèi)用CRISPR敲除腫瘤基因進(jìn)行腫瘤治療也是研究人員夢(mèng)寐以求的事情更適合。雖然目前為止已經(jīng)有不少研究用CRISPR進(jìn)行腫瘤基因編輯，但是這些研究存在著不少問(wèn)題溝通協調，使用的方法臨床轉(zhuǎn)化也相當(dāng)困難要素配置改革。目前研究采用的體內(nèi)給藥CRISPR-Cas9質(zhì)粒DNA的手段主要有三種，一種是水流動(dòng)力學(xué)注射帶動擴大，即將約為小鼠體重10%的DNA質(zhì)粒注射液通過(guò)尾靜脈在3-8秒內(nèi)注射到小鼠體內(nèi)（腦補(bǔ)一下打點(diǎn)滴時(shí)的情形）核心技術體系，這會(huì)造成血壓瞬間升高，可能造成器官損傷持續發展，在人體內(nèi)幾乎無(wú)法實(shí)現(xiàn)必然趨勢；另一種方式則是采用腺病毒載體進(jìn)行CRISPR質(zhì)粒DNA的輸送，但是腺病毒具有免疫原性創造性，有引發(fā)免疫反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)發展的關鍵，zui重要的是由于CRISPR質(zhì)粒DNA太大，腺病毒負(fù)載能力實(shí)在太低規模設備，因此效率不高真諦所在，心有余而力不足；第三種則是局部注射質(zhì)粒競爭力，其缺點(diǎn)不言而喻充分，對(duì)于人體深部疾病似乎鞭長(zhǎng)莫及啊。

基于此集聚，魏于全院士課題組合成了一種新型的人工病毒載體用于CRISPR-Cas9質(zhì)粒DNA的輸送競爭力，他們合成了靶向乳腺癌中的MTH1基因（一個(gè)可以促使基因組穩(wěn)定、阻止細(xì)胞死亡的基因狀況，乳腺癌病人腫瘤組織高表達(dá)）的CRISPR-Cas9質(zhì)粒DNA（Cas9-hMTH1）在小鼠體內(nèi)進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證機製性梗阻。由于質(zhì)粒DNA帶負(fù)電，他們選擇了帶正電的氟原子修飾的聚乙烯亞胺（PF33）與質(zhì)粒DNA混合全過程，通過(guò)正負(fù)電荷相互作用形成人工病毒（PF33/ Cas9-hMTH1集成應用，實(shí)際上就是一種納米顆粒），同時(shí)為了增強(qiáng)人工病毒的輸送効率不負眾望，他們采用一種多功能高分子RGD-R8-PEG-HA對(duì)人工病毒進(jìn)行修飾得到了靶向MTH1的多功能核殼結(jié)構(gòu)CRISPR-Cas9輸送人工病毒（RRPHC/Cas9-hMTH1）高效流通，這種高分子可以使人工病毒更穩(wěn)定，同時(shí)避免被免疫系統(tǒng)清除精準調控，RGD和HA可以同時(shí)靶向結(jié)合腫瘤部位高表達(dá)的整合素ανβ3和CD44受體功能，從而提高人工病毒在腫瘤部位的富集。同時(shí)機遇與挑戰，腫瘤部位高表達(dá)的透明酸質(zhì)（HA）酶可以降解HA廣泛關註，促進(jìn)Cas9-hMTH1在腫瘤中的釋放善於監督，從而增強(qiáng)療效集成技術。

體外細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)表明該人工病毒的轉(zhuǎn)染效率明顯高于商用轉(zhuǎn)染試劑SuperFect就能壓製、Lipofectamine 2000及Lipofectamine 3000，表明該載體可以更有效攜帶Cas9-hMTH1進(jìn)入細(xì)胞適應能力，同時(shí)雙重靶向策略可以使該人工病毒更特異性結(jié)合并進(jìn)入乳腺癌細(xì)胞完成基因敲除更優美。功能性實(shí)驗(yàn)表明該人工病毒可以成功敲除MTH1，導(dǎo)致癌細(xì)胞凋亡防控，顯著抑制乳腺癌細(xì)胞增殖成效與經驗。通過(guò)小鼠尾靜脈注射人工病毒（僅含5 微克 Cas9-hMTH1，而文獻(xiàn)報(bào)道水動(dòng)力學(xué)注射需要100 微克左右）后增產，可發(fā)現(xiàn)小鼠腫瘤組織有較多的人工病毒富集便利性，免疫組化分析也顯示腫瘤部位MTH1蛋白表達(dá)量顯著降低，同時(shí)小鼠腫瘤生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移也得到了明顯的抑制行動力。zui后他們對(duì)人工病毒的安全性進(jìn)行了評(píng)價(jià)提供有力支撐，血細(xì)胞計(jì)數(shù)發(fā)現(xiàn)注射人工病毒對(duì)血細(xì)胞數(shù)量無(wú)明顯影響，基因測(cè)序顯示正常組織中的突變率均低于0.4%保供，且都不是插入或者缺失突變自行開發，僅為單堿基替換突變。

雖然他們認(rèn)為該人工病毒具有較好的安全性責任，可以用于腫瘤特定基因的敲除進(jìn)行腫瘤治療應用情況，但是筆者認(rèn)為0.4%的突變率是不是還是有點(diǎn)高呢，有沒(méi)有辦法再優(yōu)化一下繼續(xù)降低脫靶率呢組建？據(jù)報(bào)道表現，他們下一步的研究計(jì)劃是使用這種人工病毒輸送其他CRISPR-Cas9質(zhì)粒DNA及功能化的DNA結(jié)合蛋白用于拓展該人工病毒的應(yīng)用范圍。