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ATCC細(xì)胞的細(xì)胞破碎

原載自:www.haibayinye.com[技術(shù)資料頻道]  2017-02-21  瀏覽次數(shù):2037

   ATCC細(xì)胞在培養(yǎng)瓶長成致密單層后強大的功能,已基本上飽和結論,為使細(xì)胞能繼續(xù)生長,同時也將細(xì)胞數(shù)量擴(kuò)大迎難而上,就必須進(jìn)行傳代(再培養(yǎng))積極。
  ATCC細(xì)胞細(xì)胞破碎:
  1、高速組織搗碎:將材料配成稀糊狀液堅持先行,放置于筒內(nèi)約1/3體積產業,蓋緊筒蓋,將調(diào)速器先撥至zui慢處情況較常見,開動開關(guān)后可持續,逐步加速至所需速度。此法適用于動物內(nèi)臟組織生產體系、植物肉質(zhì)種子等服務。
  2、ATCC細(xì)胞細(xì)胞破碎玻璃勻漿器勻漿:先將剪碎的組織置于管中能力和水平,再套入研桿來回研磨覆蓋,上下移動,即可將細(xì)胞研碎研究,此法ATCC細(xì)胞破碎程度比高速組織搗碎機(jī)為高高效,適用于量少和動物臟器組織。
  3、超聲波處理法:用一定功率的超聲波處理細(xì)胞懸液體系,使細(xì)胞急劇震蕩破裂生產製造,此法多適用于微生物材料,用大腸桿菌制備各種酶攜手共進,常選用50-100毫克菌體/毫升濃度共同,在1KG至10KG頻率下處理10-15分鐘,此法的缺點是在處理過程會產(chǎn)生大量的熱經過,應(yīng)采取相應(yīng)降溫措施簡單化。對超聲波敏感和核酸應(yīng)慎用。
  4明確了方向、反復(fù)凍融法:將ATCC細(xì)胞在-20度以下冰凍系統性,室溫融解,反復(fù)幾次單產提升,由于細(xì)胞內(nèi)冰粒形成和剩余細(xì)胞液的鹽濃度增高引起溶脹傳遞,使細(xì)胞結(jié)構(gòu)破碎。
  5勞動精神、化學(xué)處理法:有些動物細(xì)胞開展攻關合作,例如腫瘤細(xì)胞可采用十二烷基磺酸鈉(SDS)、去氧膽酸鈉等細(xì)胞膜破壞預下達,細(xì)菌細(xì)胞壁較厚的有效手段,可采用溶菌酶處理效果更好。
  無論用哪一種方法破碎ATCC細(xì)胞方案,都會使細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)或核酸水解酶釋放到溶液中關鍵技術,使大分子生物降解,導(dǎo)致天然物質(zhì)量的減少研究成果,加入二異丙基氟磷酸(DFP)可以抑制或減慢自溶作用取得了一定進展;加入碘乙酸可以抑制那些活性中心需要有疏基的蛋白水解酶的活性,加入苯甲磺酰氟化物(PMSF)也能清除蛋白水解酥活力大面積,但不是全部可能性更大,還可通過選擇pH、溫度或離子強(qiáng)度等搖籃,使這些條件都要適合于目的物質(zhì)的提取技術。

 

 

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