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技術(shù)文章 / article
ATCC細(xì)胞株培養(yǎng)操作
原載自:www.haibayinye.com[技術(shù)資料頻道] 2017-11-24 瀏覽次數(shù):2491
ATCC細(xì)胞株是用單細(xì)胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法,由單細(xì)胞增殖形成的細(xì)胞群狀態。細(xì)胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個(gè)培養(yǎng)期間始終存在指導。原代培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功后即為細(xì)胞系(cell line), 由原先存在于原代培養(yǎng)物中的細(xì)胞世系所組成鍛造。
ATCC細(xì)胞株培養(yǎng)操作:
將凍存的ATCC細(xì)胞株從有干冰的包裝中取出,理解復(fù)蘇培養(yǎng)持續創新,或迅速轉(zhuǎn)移放置在液氧罐氣相層在——130°C以下的度存儲改善。
1、先準(zhǔn)備好細(xì)胞培養(yǎng)皿或細(xì)胞株培養(yǎng)瓶協調機製,及產(chǎn)品說明推薦的相應(yīng)細(xì)胞培養(yǎng)基信息化。并在37°c水浴中預(yù)先溫?zé)峒?xì)胞培養(yǎng)基
2實踐者、小心取出裝有細(xì)胞的凍存管,保持管蓋擰緊數據,將凍存管蓋一下的部分置于37°C水浴中并輕微的攪拌以幫助解凍發揮。解凍過程應(yīng)該盡快長足發展,大約短于2分鐘或待zui后一塊小冰晶體剛?cè)诨€步前行,就?yīng)該將細(xì)胞凍存管取出水浴。
3逐步改善、在從水浴中取出的細(xì)胞凍存管表面噴灑70%乙醇配制的消毒劑效果較好,用于菌紙巾或紗布試干。之后的操作步驟都應(yīng)該遵循在無菌條件下生物安全柜中嚴(yán)格操作持續。
4等多個領域、小心擰干凍存管的頂部產品和服務,將管內(nèi)容物用1MI移槍轉(zhuǎn)移到9毫升培養(yǎng)基的無菌離心管中。離心5到7分鐘(125*g).小心吸去上清液以去除抗凍劑(二甲基亞砜)活動上,避免丟失細(xì)胞沉淀導向作用。將細(xì)胞沉淀重懸于配好的*培養(yǎng)基中應用的選擇。將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)容器,輕輕搖晃使細(xì)胞均勻的分布背景下。生長較慢的細(xì)胞株可重懸于5——8mI培養(yǎng)基并轉(zhuǎn)移到T125培養(yǎng)瓶綜合措施。生長較快的細(xì)胞株可重懸于12——20mI培養(yǎng)基并轉(zhuǎn)移到T75培養(yǎng)瓶自然條件。
5、將細(xì)胞培養(yǎng)容器置于細(xì)胞培養(yǎng)箱充分發揮,在溫度37°C二氧化碳濃度5%的培養(yǎng)條件下進(jìn)行卵育。細(xì)胞培養(yǎng)24小時(shí)候后應(yīng)在顯微鏡下觀察細(xì)胞株形態(tài)和生長狀況 重要方式。
ATCC細(xì)胞株是通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得的具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志的培養(yǎng)細(xì)胞。從培養(yǎng)代數(shù)來講,可培養(yǎng)到40-50代非常重要。細(xì)胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個(gè)培養(yǎng)期間始終存在。對于人類腫瘤細(xì)胞營造一處,在體外培養(yǎng)半年以上重要意義,生長穩(wěn)定,并連續(xù)傳代的即可稱為連續(xù)性株或系提高。