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技術(shù)文章 / article
ATCC細(xì)胞冷凍保存方法
原載自：www.haibayinye.com[技術(shù)資料頻道] 2018-02-24 瀏覽次數(shù)：2859
ATCC細(xì)胞通常保存在凍存管中用干冰運(yùn)輸提升，或是在培養(yǎng)瓶中常溫運(yùn)輸的特性。但對(duì)于中國(guó)客戶擴大公共數據，由于運(yùn)輸時(shí)間稍長(zhǎng)不同需求，都是采用干冰運(yùn)輸?shù)姆绞健?div> 在收到凍存細(xì)胞后求得平衡，很重要的一點(diǎn)是迅速解凍使其立即復(fù)蘇并除去DMSO激發創作，然后將它們放置到培養(yǎng)基中競爭激烈。如果做不到上面這點(diǎn)開展面對面，需將細(xì)胞存儲(chǔ)在液氮中（-130℃以下）系統。不要將凍存細(xì)胞儲(chǔ)存在高于-130℃的溫度下，這會(huì)使細(xì)胞存活率迅速下降連日來。
ATCC細(xì)胞注意事項(xiàng)：
】焖偃谌?。?）欲冷凍保存之細(xì)胞應(yīng)在生長(zhǎng)良好（logphase）且存活率高之狀態(tài)，約為80–90％致密度系統。
≡鰪?。?）冷凍前檢測(cè)細(xì)胞是否仍保有其*性質(zhì)，例如hybridoma應(yīng)在冷凍保存前一至二日測(cè)試是否有抗體之產(chǎn)生交流等。
「訌V闊。?）注意冷凍保護(hù)劑之品質(zhì)。DMSO應(yīng)為試劑級(jí)等級(jí)提高，無(wú)菌且無(wú)色（以0.22micron FGLP flon過(guò)濾或是直接購(gòu)買無(wú)菌產(chǎn)品可以使用，如Sigma D-2650）進入當下，以5～10ml小體積分裝，4℃避光保存效高化，勿作多次解凍保持競爭優勢。Glycerol亦應(yīng)為試劑級(jí)等級(jí)，以高壓蒸汽滅菌后避光保存發展機遇。在開(kāi)啟后一年內(nèi)使用長效機製，因長(zhǎng)期儲(chǔ)存后對(duì)細(xì)胞會(huì)有毒性。
ATCC細(xì)胞冷凍保存方法：
∪夹g方案。?）傳統(tǒng)方法：冷存管置于4℃10分鐘→ -20℃30分鐘→ -80℃16～18小時(shí)（或隔夜）→液氮槽vaporphase長(zhǎng)期儲(chǔ)存分享。-20℃不可超過(guò)1小時(shí)，以防止冰晶過(guò)大信息化，造成細(xì)胞大量死亡方式之一，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些新型儲能。
撔履芰?。?）程序降溫：利用已設(shè)定程序的等速降溫機(jī)以-1～-3℃/分鐘之速度由室溫降至（-80℃以下）-120℃，再放在液氮槽vaporphase長(zhǎng)期儲(chǔ)存範圍。適用于懸浮型細(xì)胞與hybridoma之保存求得平衡。
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