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技術(shù)文章 / article
一個(gè)好的ATCC細(xì)胞株有多方面要求
原載自:www.haibayinye.com[技術(shù)資料頻道] 2018-05-26 瀏覽次數(shù):3120
一個(gè)好的ATCC細(xì)胞株有多方面要求:
1. 產(chǎn)量高,高的產(chǎn)量直接降低固定投資和單次生產(chǎn)成本。
2. 產(chǎn)品質(zhì)量符合要求智慧與合力。產(chǎn)品質(zhì)量影響藥效和安全性。
3. 穩(wěn)定性示範。產(chǎn)量和質(zhì)量在生產(chǎn)傳代過程中不應(yīng)有大的改變特征更加明顯。一般認(rèn)為在60-90PDL產(chǎn)量變化不超過30%是可以接受的培養。
4. 與生產(chǎn)過程的相容性求索。細(xì)胞株需要適合大規(guī)模生產(chǎn)放大讓人糾結。
5. 合規(guī)。ATCC細(xì)胞株的構(gòu)建過程應(yīng)避免接觸或使用動物來源成分或其它可能影響安全性的成分穩定發展, 保證單克隆性(clonality)以及整個(gè)過程的實(shí)驗(yàn)記錄完整基石之一。
ATCC細(xì)胞株無菌操作注意事項(xiàng)
1.操作前要洗手,進(jìn)入超凈臺后手要用75%酒精或0.2%新潔爾滅擦試。試劑等瓶口也要擦試共同努力。
2.點(diǎn)燃酒精燈行業內卷,操作在火焰附近進(jìn)行,耐熱物品要經(jīng)常在火焰上燒灼逐漸完善,金屬器械燒灼時(shí)間不能太長參與能力,以免退火,并冷卻后才能夾取組織是目前主流,吸取過營養(yǎng)液的用具不能再燒灼充分發揮,以免燒焦形成碳膜。
3.操作動作要準(zhǔn)確敏捷應用創新,但又不能太快競爭激烈,以防空氣流動持續創新,增加污染機(jī)會改善。
4.不能用手觸已消毒器皿的工作部分,工作臺面上用品要布局合理協調機製。
5.瓶子開口后要盡量保持45℃斜位信息化。
6.吸溶液的吸管等不能混用。
ATCC細(xì)胞株的細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍實踐者,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻取得明顯成效。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液數據,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻創新的技術。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)隔夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基顯著,培養(yǎng)隔夜)快速增長。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%占,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)高質量。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞激發創作,1000RPM條件下離心4分鐘前景,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻增幅最大,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中共享應用。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后標準,將剩余細(xì)胞懸起示範推廣,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)ATCC細(xì)胞株的細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存積極參與。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)問題分析,應(yīng)將細(xì)胞收集,1000RPM條件下離心5分鐘交流研討,少量保存上清液(防止細(xì)胞吸走)更加完善,加入部分新鮮培養(yǎng)基,加入到凍存管中應用的選擇,在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存十大行動。
1. 產(chǎn)量高,高的產(chǎn)量直接降低固定投資和單次生產(chǎn)成本。
2. 產(chǎn)品質(zhì)量符合要求智慧與合力。產(chǎn)品質(zhì)量影響藥效和安全性。
3. 穩(wěn)定性示範。產(chǎn)量和質(zhì)量在生產(chǎn)傳代過程中不應(yīng)有大的改變特征更加明顯。一般認(rèn)為在60-90PDL產(chǎn)量變化不超過30%是可以接受的培養。
4. 與生產(chǎn)過程的相容性求索。細(xì)胞株需要適合大規(guī)模生產(chǎn)放大讓人糾結。
5. 合規(guī)。ATCC細(xì)胞株的構(gòu)建過程應(yīng)避免接觸或使用動物來源成分或其它可能影響安全性的成分穩定發展, 保證單克隆性(clonality)以及整個(gè)過程的實(shí)驗(yàn)記錄完整基石之一。
ATCC細(xì)胞株無菌操作注意事項(xiàng)
1.操作前要洗手,進(jìn)入超凈臺后手要用75%酒精或0.2%新潔爾滅擦試。試劑等瓶口也要擦試共同努力。
2.點(diǎn)燃酒精燈行業內卷,操作在火焰附近進(jìn)行,耐熱物品要經(jīng)常在火焰上燒灼逐漸完善,金屬器械燒灼時(shí)間不能太長參與能力,以免退火,并冷卻后才能夾取組織是目前主流,吸取過營養(yǎng)液的用具不能再燒灼充分發揮,以免燒焦形成碳膜。
3.操作動作要準(zhǔn)確敏捷應用創新,但又不能太快競爭激烈,以防空氣流動持續創新,增加污染機(jī)會改善。
4.不能用手觸已消毒器皿的工作部分,工作臺面上用品要布局合理協調機製。
5.瓶子開口后要盡量保持45℃斜位信息化。
6.吸溶液的吸管等不能混用。
ATCC細(xì)胞株的細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍實踐者,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻取得明顯成效。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液數據,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻創新的技術。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)隔夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基顯著,培養(yǎng)隔夜)快速增長。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%占,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)高質量。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞激發創作,1000RPM條件下離心4分鐘前景,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻增幅最大,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中共享應用。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后標準,將剩余細(xì)胞懸起示範推廣,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)ATCC細(xì)胞株的細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存積極參與。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)問題分析,應(yīng)將細(xì)胞收集,1000RPM條件下離心5分鐘交流研討,少量保存上清液(防止細(xì)胞吸走)更加完善,加入部分新鮮培養(yǎng)基,加入到凍存管中應用的選擇,在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存十大行動。