產(chǎn)品搜索
聯(lián)系我們
聯(lián)系人：蔣經(jīng)理
電話：4008750250
手機(jī)：18066071954
地址：南京市棲霞區(qū)緯地路9號(hào)
Email： zhangxiangwen@cobioer.com
電話：4008750250
手機(jī)：18066071954
地址：南京市棲霞區(qū)緯地路9號(hào)
Email： zhangxiangwen@cobioer.com
技術(shù)文章 / article
你知道ATCC細(xì)胞如何解凍嗎機構？
原載自：www.haibayinye.com[技術(shù)資料頻道] 2022-03-02 瀏覽次數(shù)：1401
ATCC細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)通過(guò)在支持物（如蓋玻片）上培養(yǎng)貼壁細(xì)胞帶來全新智能，可以應(yīng)用抗體檢測(cè)細(xì)胞表面抗原的表達(dá)或進(jìn)行酶細(xì)胞化學(xué)以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)核心技術。該方法的優(yōu)點(diǎn)是細(xì)胞貼壁牢固各方面，能夠維持細(xì)胞生長(zhǎng)時(shí)的狀態(tài)兩個角度入手。
ATCC細(xì)胞的冷凍保存方法：
傳統(tǒng)方法是冷存管置于4℃10分鐘→-20℃30分鐘→-80℃16-18小時(shí)（或隔夜）→液氮槽長(zhǎng)期儲(chǔ)存提供有力支撐。-20℃不可超過(guò)1小時(shí)應用，以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡品率，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃冰箱中相貫通，惟存活率稍微降低一些。
程序降溫則利用已設(shè)定程序的等速降溫機(jī)以-1~-3℃/分鐘之速度由室溫降至（-80℃以下）-120℃積極影響，再放在液氮槽長(zhǎng)期儲(chǔ)存自動化方案。適用于懸浮型細(xì)胞之保存緊密協作。
那么ATCC細(xì)胞又如何解凍呢？
1.冷凍細(xì)胞之活化原則為快速解凍線上線下，以避免冰晶重新結(jié)晶而對(duì)細(xì)胞造成傷害規模，導(dǎo)致細(xì)胞之死亡。
2.細(xì)胞活化后講道理，約需數(shù)日發展目標奮鬥，或繼代一至二代，其細(xì)胞生長(zhǎng)或特性表現(xiàn)才會(huì)恢復(fù)正常更多的合作機會。
3.材料：37℃恒溫水槽延伸、新鮮培養(yǎng)基、無(wú)菌吸管/離心管/培養(yǎng)瓶服務好、液氮或干冰容器新趨勢。
4.主要步驟：
①操作人員應(yīng)戴防護(hù)面罩及手套共謀發展，防止冷凍管可能爆裂之傷害凝聚力量；
②自液氮或干冰容器中取出冷凍管聽得進，檢查蓋子是否旋緊新的力量，由于熱脹冷縮過(guò)程，此時(shí)蓋子易松掉便利性；
∪嬲故?、蹖⑿迈r培養(yǎng)基置于37℃水槽中回溫，回溫后噴以70%酒精并擦拭之深刻認識，移入無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)核心技術；
④取出冷凍管主動性，立即放入37℃水槽中快速解凍創造性，輕搖冷凍管使其在1分鐘內(nèi)全部融化，以70%酒精擦拭保存管外部道路，移入無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)規模設備；
⑤取出解凍之細(xì)胞懸浮液指導，緩緩加入有培養(yǎng)基之培養(yǎng)容器內(nèi)（稀釋比例為1：10-1：15）競爭力，混合均勻，放入CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)進一步完善。取0.1ml解凍細(xì)胞懸浮液作存活測(cè)試集聚；
⑥解凍后是否立即去除冷凍保護(hù)劑（如DMSO），依細(xì)胞種類而異哪些領域，一般而言敢於挑戰，大都不需要立即去除冷凍保護(hù)劑。惟若要立即去除建立和完善，則將解凍之細(xì)胞懸浮液加入含有5-10ml培養(yǎng)基之離心管內(nèi)提供了遵循，離心1000rpm，5分鐘產業，移去上清液滿意度，加入新鮮培養(yǎng)基情況較常見，混合均勻可持續，放入CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)；
◇w製、呷舨恍枇⒓慈コ鋬霰４鎰嫿?，則在解凍培養(yǎng)后隔日更換培養(yǎng)基。
會(huì)員_a.png)