ROS原癌基因 1 (ROS1) 由位于染色體6q22.1的ROS1基因編碼空間載體，屬于酪氨酸激酶胰島素受體亞家族醒悟，于1986年在涉及肌肉瘤RNA UR2腫瘤病毒的研究中被發(fā)現(xiàn)。ROS1的生理作用仍存在爭(zhēng)議集成技術；其表達(dá)主要在肺組織中觀察到就能壓製，其次是宮頸和結(jié)腸∵m應能力？梢韵胂蟾鼉灻?，酪氨酸激酶胰島素受體在胚胎發(fā)育中起著關(guān)鍵作用各方面。ROS1蛋白顯示出與ALK（均屬于胰島素受體超家族）的大量同源性，特別是在ATP結(jié)合位點(diǎn)（84% 同源性）和激酶域（64% 同源性）成效與經驗。ROS1的融合突變適應性，通常會(huì)導(dǎo)致與幾個(gè)融合伙伴的基因融合，由此產(chǎn)生的融合蛋白是強(qiáng)大的致癌驅(qū)動(dòng)因素稍有不慎。因此重要作用，ROS1激酶活性被持續(xù)激活，由于JAK/STAT最為顯著、PI3K/AKT和MAPK/ERK信號(hào)通路的上調(diào)完成的事情，導(dǎo)致細(xì)胞增殖、存活和遷移增加穩定。ROS1已在體外和體內(nèi)顯示出致瘤潛力，膠質(zhì)母細(xì)胞瘤是第一個(gè)顯示出具有 ROS1重排的人類癌癥供給。隨后在其他惡性腫瘤中觀察到ROS1融合優勢與挑戰，包括 NSCLC、黑色素瘤和偶爾的膽管癌解決方案、血管肉瘤趨勢、卵巢癌、胃癌和結(jié)直腸癌上高質量。ROS1改變既不能遺傳也不能作為基因改變獲得一站式服務。

ROS1的重排約占NSCLC患者的2%，在NSCLC中常見(jiàn)的融合伙伴如下表所示深入交流，其中占比最高的是CD74基因引領作用。

Table 1. Main ROS1 fusion partners in non-small cell lung cancer (NSCLC).

CD74位于染色體5q33.1，該基因編碼的蛋白質(zhì)與II類主要組織相容性復(fù)合體 (MHC) 相關(guān)處理，是調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)抗原呈遞的重要分子伴侶建設。它還充當(dāng)細(xì)胞因子巨噬細(xì)胞遷移抑制因子 (MIF) 的細(xì)胞表面受體，當(dāng)其與編碼的蛋白質(zhì)結(jié)合時(shí)助力各行，會(huì)啟動(dòng)存活途徑和細(xì)胞增殖前來體驗。這種蛋白質(zhì)還與淀粉樣前體蛋白 (APP) 相互作用并抑制淀粉樣蛋白 β (Abeta) 的產(chǎn)生。

在非小細(xì)胞肺癌的診斷中確定性，NCCN指南明確描述“ROS1 is a receptor tyrosine kinase that can be rearranged in NSCLC, resulting in dysregulation and inappropriate signaling through the ROS1 kinase domain."強(qiáng)調(diào)了ROS1的分子診斷的意義更加廣闊，是必須要檢測(cè)的一個(gè)分子marker，同時(shí)推薦的檢測(cè)方法描述為“FISH break-apart probe methodology can be deployed; however, it may under-detect the FIG-ROS1 variant. IHC approaches can be deployed; however, IHC for ROS1 fusions has low specificity, and follow-up confirmatory testing is a necessary component of utilizing ROS1 IHC as a screening modality. Numerous NGS methodologies can detect ROS1 fusions, although DNA-based NGS may under-detect ROS1 fusions. Targeted real-time PCR assays are utilized in some settings, although they are unlikely to detect fusions with novel partners."

全套合集之一：藥靶模型

CD74-ROS1融合蛋白講故事，可以組成型激活細(xì)胞增殖非常完善，選擇在依賴IL3的BaF3細(xì)胞模型上，外源過(guò)表達(dá)CD74-ROS1蛋白自動化方案，可以作為驅(qū)動(dòng)基因緊密協作，驅(qū)動(dòng)Baf3細(xì)胞的增殖越來越重要，而不需要IL3，因此可以用于針對(duì)CD74-ROS1的抑制劑的活性檢測(cè)發揮重要作用⌒盐?；谝陨系脑恚瓢凵镩_發(fā)了CD74-ROS1/Baf3藥靶模型高質量，可以在In vitro層面檢測(cè)樣本的抑制活性也逐步提升，同樣也可以在in vivo層面做CDX模型，檢測(cè)藥物的活性註入了新的力量。

Fig 1. Sanger sequencing of CD74-ROS1/BaF3(CBP73331)重要的作用，左側(cè)為CD74基因，右側(cè)為ROS1基因去創新。

Fig 2. Cell-based kinase assay of CD74-ROS1/BaF3(CBP73331)足夠的實力，不同陽(yáng)性藥物對(duì)CD47-ROS1細(xì)胞增殖抑制的活性比較。

全套合集之二：DNA標(biāo)準(zhǔn)品

我們知道CD74位于5號(hào)染色體上結構，ROS1位于6號(hào)染色體上更適合，CD74-ROS1融合是一種易位融合，常見(jiàn)的CD74(E6)-ROS1(E34)在臨床病人的DNA測(cè)序上溝通協調，CD74的斷點(diǎn)是在6號(hào)內(nèi)含子上要素配置改革，ROS1的斷點(diǎn)是在33號(hào)內(nèi)含子上，而且不同的病例保障性，斷點(diǎn)不止一個(gè)影響力範圍，因此基于CD74-ROS1在DNA層面的標(biāo)準(zhǔn)品，首先肯定斷點(diǎn)在內(nèi)含子上新創新即將到來，其次一種標(biāo)準(zhǔn)品僅代表一種斷點(diǎn)邁出了重要的一步。基于以上信息設施，科佰生物通過(guò)基因編輯技術(shù)開發(fā)定制了一款DNA層面的CD74(E6)-ROS1(E34)發展的關鍵，通過(guò)sanger測(cè)序、ddPCR檢測(cè)對(duì)DNA做定標(biāo)規模設備，發(fā)布一款DNA標(biāo)準(zhǔn)品真諦所在。

Fig 3. Sanger sequencing of CD74-ROS1 Translocation(CBP20177D)，左側(cè)為CD74基因競爭力，右側(cè)為ROS1基因充分，斷點(diǎn)為內(nèi)含子斷點(diǎn)。

Fig 4.ddPCR of CD74-ROS1 Translocation(CBP20177D)集聚，檢測(cè)顯示該標(biāo)準(zhǔn)品突變頻率為50%競爭力。

全套合集之三：RNA標(biāo)準(zhǔn)品

CD74-ROS1融合在病理上有意義，主要是因?yàn)槿诤系鞍椎幕钚裕簿褪钦f(shuō)機製性梗阻，假設(shè)DNA層面出現(xiàn)融合機製，但是沒(méi)有RNA，進(jìn)而沒(méi)有蛋白集成應用，其實(shí)也沒(méi)有任何意義的探討，因此針對(duì)CD74-ROS1的RNA的檢測(cè)，會(huì)更有意義高效流通≌{解製度？瓢凵锿ㄟ^(guò)基因重組的技術(shù)，在RNA層面定制出CD74(E6)-ROS1(E34)的細(xì)胞模型功能，再通過(guò)sanger測(cè)序應用的因素之一，ddPCR檢測(cè)對(duì)RNA做定標(biāo)，發(fā)布一款RNA標(biāo)準(zhǔn)品預期。

Fig 5. Sanger sequencing of CD74-ROS1 Fusion(CBP20170R)敢於監督，左側(cè)為CD74基因，右側(cè)為ROS1基因結構，斷點(diǎn)為外顯子斷點(diǎn)更合理。

Fig 6. DdPCR of CD74-ROS1 Fusion(CBP20170R)，檢測(cè)顯示該標(biāo)準(zhǔn)品拷貝數(shù)為2244.5copies/ng強大的功能。

全套合集之四：ddPCR試劑盒

不管是針對(duì)CD74-ROS1融合的藥物研發(fā)，還是診斷解決方案，在各種應(yīng)用檢測(cè)中優勢，都少不了PCR的檢測(cè)技術(shù)，比如在藥靶模型的構(gòu)建中增產，我們可以使用PCR的技術(shù)看外源基因是否過(guò)表達(dá)便利性，看陽(yáng)性比例，篩選克隆行動力，方法學(xué)優(yōu)化等等提供有力支撐，比如在診斷中，可以篩選陽(yáng)性病人保供，性能評(píng)價(jià)自行開發，平時(shí)的質(zhì)控等等。在PCR技術(shù)中責任，ddPCR是一種靈敏度高的絕對(duì)定量的一種方法應用情況，比起Q-PCR，靈敏度高組建，不需要做標(biāo)準(zhǔn)曲線表現，比起NGS，成本低，周期短結論，能快遞出結(jié)果和諧共生。科佰生物開發(fā)了針對(duì)DNA和RNA的ddPCR檢測(cè)試劑盒適應性強，適用于在藥物研發(fā)和臨床診斷中的檢測(cè)技術交流。

Fig 7. 針對(duì)CD74-ROS1的DNA層面ddPCR性能評(píng)價(jià)，使用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋到不同的%AF建設，在不同的%AF下顯示準(zhǔn)確的檢測(cè)能力在此基礎上。

Fig 8. 針對(duì)CD74-ROS1的RNA層面ddPCR性能評(píng)價(jià)，使用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋到不同的拷貝數(shù)前來體驗，在不同的拷貝數(shù)下顯示準(zhǔn)確的檢測(cè)能力（注意RNA需要反轉(zhuǎn)錄為cDNA檢測(cè)自主研發，反轉(zhuǎn)錄需要在*相同的體系下開展）。