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技術(shù)文章 / article
剛收到的細胞株如何進行合理的處理?
原載自:www.haibayinye.com[技術(shù)資料頻道] 2022-11-09 瀏覽次數(shù):1390
當我們剛收到細胞株購買的包裹時共創美好,請檢查細胞株冷凍管是否有解凍情形,若有請立即告知供貨商技術交流。細胞株請盡速開始培養(yǎng)便利性,或立即冷凍保存(置于-70℃,隔夜后聽得懂,移到liq N2)應用優勢。
冷凍細胞解凍程序如下:
1.依據(jù)細胞株數(shù)據(jù)單規(guī)定之基礎(chǔ)培養(yǎng)基種類、血清種類和其它規(guī)定之成份和比例全方位,制備培養(yǎng)基高效節能。絕大多數(shù)之細胞均無法立即適應不同之基礎(chǔ)培養(yǎng)基或不同之血清種類,若因?qū)嶒炐枰缶?,必須有所不同時新創新即將到來,務必以緩慢比例漸次改變培養(yǎng)基組成,確定細胞適應后有序推進,方進行所需之實驗設施。
2.FBS(胚牛血清),CS(小牛血清)和HS(馬血清)對細胞而言差異極大堅定不移,請務必依據(jù)細胞株資料單規(guī)定之血清種類培養(yǎng)之組合運用。
3.將培養(yǎng)基置于37℃水槽中回溫,回溫后噴以70%酒精并擦拭之推進高水平,移入無菌操作臺內(nèi)脫穎而出。取出冷凍管,立即放入37℃水槽中快速解凍資料,水面高度不可接近或高過冷凍管之蓋沿廣泛應用,否則易發(fā)生污染。輕搖冷凍管使其在1分鐘內(nèi)全部融化后橫向協同,以70%ethanol擦拭冷凍管外部哪些領域,移入無菌操作臺內(nèi)。
4.依據(jù)細胞種類和濃度不斷創新,于無菌操作臺內(nèi)取10 ml培養(yǎng)基加至T25或T75 flask中建立和完善。取出已解凍之細胞懸浮液,緩緩加入T25或T75 flask內(nèi)之培養(yǎng)基,混合均勻大型,放入37℃服務效率,5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
5.對絕大多數(shù)細胞而言重要意義,1%以下之冷凍保護劑DMSO統籌發展,不會對細胞之貼附或活化有不良影響,不需立刻由解凍細胞中去除體系,待第二天確定細胞生長或貼附良好后再去除即可生產製造。惟對極少數(shù)因?qū)MSO敏感或會造成細胞分化之細胞,需立即去除DMSO者攜手共進,則可將解凍后之細胞懸浮液放入5-10 ml培養(yǎng)基中共同,離心300 xg(約1000 rpm),5分鐘經過,小心移去上清液簡單化,加入適量新鮮培養(yǎng)基,將細胞均勻混合后明確了方向,轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶中系統性,再放入37℃性能,5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)基礎。