科佰生物

科佰生物針對以上應(yīng)用開發(fā)對應(yīng)的檢測試劑盒創新內容，配套科佰生物的參考品，對試劑盒做性能評價力量，如下我們以EGFR T790M為例：

待測樣本：20個陰性樣本和1個NTC我有所應。分別將投入量設(shè)置為10ng和40ng，每個樣本做兩個重復(fù)進(jìn)行Bio-Rad數(shù)字PCR檢測深入實施。

由上數(shù)據(jù)可見：無論是10ng還是40ng調解製度，LOB控制在2拷貝以內(nèi)（一般噪音拷貝為5以內(nèi)），雜點不呈現(xiàn)劑量的依賴功能，是隨機產(chǎn)生的噪音信號應用的因素之一。

待測樣本：10個NGS驗證為陽性的樣本（編號1-10）;  10個NGS驗證為陰性的樣本（編號11-20）。對20個樣本分別使用數(shù)字PCR檢測預期。

由上數(shù)據(jù)可見：

①測試10個NGS陽性樣本,檢測結(jié)果均為陽性敢於監督，陽性符合率100%，并定量檢出變異頻率結構。

②測試10個NGS陰性樣本,檢測結(jié)果均為陰性重要的作用，陰性符合率100%，定值變異頻率均為0%規模最大。

1穩中求進、投入量與拷貝數(shù)、頻率之間的線性測試

首先選取50%突變頻率的EGFR T790M標(biāo)準(zhǔn)品(CBP10402)最深厚的底氣，該標(biāo)準(zhǔn)品是通過基因編輯協同控製，二等位基因，CN=2品質，編輯一條為mutation利用好，一條為WT，經(jīng)過理論值計算解決問題、Sanger測序系列、Bio-Rad DdPCR試劑盒（Assay ID: dHsaCP2000019）共同驗證，確認(rèn)為50%的頻率相互配合。

1.1 投入量在0.1ng~200ng間設(shè)置10個梯度空間載體，進(jìn)行數(shù)字PCR檢測（2復(fù)孔），分別考量FAM拷貝數(shù)與投入量是否線性相關(guān)相對簡便、VIC拷貝數(shù)與投入量是否線性相關(guān)重要組成部分；

1.2 投入量在0.1ng~200ng間設(shè)置10個梯度，進(jìn)行數(shù)字PCR檢測（2復(fù)孔），判斷是否滿足%AF=50±10%波動勃勃生機。

由上數(shù)據(jù)可見：

①200 ng投入量過大助力各業，拷貝數(shù)不呈現(xiàn)線性，雖然滿足45-55%范圍提供有力支撐，但是不適合做單一通道的拷貝數(shù)判定應用；

②0.1 ng投入量過小，拷貝數(shù)不呈現(xiàn)線性技術交流，同時42.59%也低于45%先進的解決方案，不適合做單一通道，也不適合做雙通道創造更多；

因此：范圍為0.5-100ng宣講活動。

2、線性稀釋不同頻率理論值與檢測值的線性測試

根據(jù)以上結(jié)論工藝技術，我們選取10ng作為進(jìn)一步的%AF線性范圍探索效率，首先使用EGFR T790M的對應(yīng)的陰性標(biāo)準(zhǔn)品，對50%的標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行有限稀釋近年來，0.1%-50%間設(shè)置9個AF梯度講道理，進(jìn)行數(shù)字PCR檢測（2復(fù)孔）。

由上數(shù)據(jù)可見：在10ng的投入量下技術先進，AF%呈現(xiàn)非常好的線性稀釋更多的合作機會，存在波動，但是都在誤差范圍內(nèi)認為。

我們可以通過理論計算來預(yù)測下可能的檢測限范圍服務好。當(dāng)控制拷貝在15000（對應(yīng)50ng input）以內(nèi)時LOB數(shù)據(jù)是2，2/15000=0.0133%提高鍛煉，預(yù)測檢測限為0.0200%。

在如此低頻的情況下凝聚力量，臨床適用場景適合ctDNA有所提升，一般來說臨床上10ml全血，一般中位值ctDNA是20-40ng新的力量，取低值20ng先進水平。20ng 理論值6000個拷貝數(shù)，2/6000=0.0333%全面展示，預(yù)測檢測限為0.0500%重要平臺。

0.05%的誤差范圍是±50%，就是0.025-0.075%核心技術，因此我們選擇3個點應用提升，探尋LOD分別為 0.010%、0.050%、0.100%發展的關鍵，要求95%檢出道路。

0.010%  

對20個0.01%的樣本進(jìn)行數(shù)字PCR檢測，觀察在0.005-0.015%以內(nèi)是否達(dá)成95%檢出多種方式。

0.05%  

對20個0.05%的樣本進(jìn)行數(shù)字PCR檢測對外開放，觀察在0.025-0.075%以內(nèi)是否達(dá)成95%檢出。

0.1%  

對20個0.1%的樣本進(jìn)行數(shù)字PCR檢測深入交流研討，觀察在0.05-0.15%以內(nèi)是否達(dá)成95%檢出資料。

由上數(shù)據(jù)可見：選擇0.05%作為該檢測試劑盒的檢測限LOD。

選取強陽性2%樣本20個關註度，中陽性1%樣本20個橫向協同，弱陽性0.2%樣本20個分別進(jìn)行數(shù)字PCR檢測。

由上數(shù)據(jù)可見：強陽性2% 更讓我明白了、中陽性1% 迎難而上、弱陽性0.2%三種檢測體系下，誤差均在合理的范圍內(nèi)探索，精密度良好堅持先行。

首先使用EGFR T790M的對應(yīng)的陰性標(biāo)準(zhǔn)品，對50%的標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行有限稀釋滿意度，每個梯度使用陰性樣本兩倍稀釋情況較常見，接著對11個樣本進(jìn)行檢測。

由上數(shù)據(jù)可見：當(dāng)AF在0.05%-50%范圍內(nèi)主要抓手，對應(yīng)的回收率在80-120%范圍體製，符合預(yù)期。

取10個不同AF（1%~50%）的標(biāo)準(zhǔn)品樣本創新科技，分別安排實驗員A服務延伸、實驗員B在同一天，每人進(jìn)行四次檢測具有重要意義。

由上數(shù)據(jù)可見：EGFR T790M檢測體系是穩(wěn)定可重復(fù)的檢出的進一步。

取10個不同AF（1%~50%）的標(biāo)準(zhǔn)品樣本，分別安排①實驗員A強大的功能、實驗員B在同一天進(jìn)行每人四次實驗測試實際需求；②實驗員A在第一天、第二天分別進(jìn)行四次實驗測試優勢；③實驗員A在第一天進(jìn)行四次實驗測試善謀新篇，實驗員B在第二天進(jìn)行四次實驗測試。

由上數(shù)據(jù)可見：EGFR T790M檢測體系是穩(wěn)定可重復(fù)的在不同人便利性、不同時間檢出方法，重現(xiàn)的高產。