臨床標(biāo)本的收集和保存

  用于ELISA測定的臨床標(biāo)本zui為常用的是血清（漿）服務效率，有時(shí)因?yàn)樘囟ǖ臋z測目的規則製定，也用到唾液等形式、腦脊液深入闡釋、尿液不折不扣、糞便等標(biāo)本很重要。目前臨床上使用血清標(biāo)本測定的標(biāo)志物一般有傳染性病原體的抗原和抗體培訓、腫瘤標(biāo)志物自動化裝置、激素示範、特種蛋白、細(xì)胞因子和治療藥物等有很大提升空間。對用于激素和治療藥物測定的血清標(biāo)本的收集運行好，要注意收集時(shí)間甚或體位有可能會(huì)對測定結(jié)果產(chǎn)生影響。如可的松在早晨4～6點(diǎn)之間可能性更大，會(huì)有一峰值出現(xiàn)：生長激素部署安排、促黃體激素（LH）和促卵泡激素（FSH）均以陣發(fā)性方式釋放，因此技術，在測定此類激素時(shí)推廣開來，有必要在密切相連的時(shí)間間隔內(nèi)采取數(shù)份血樣本，以其中間值為測定值相對較高。又如當(dāng)從臥位變?yōu)檎玖⑽粫r(shí)資源配置，血清中腎素活性將出現(xiàn)明顯增高。再如治療藥物的檢測大幅增加，應(yīng)根據(jù)藥代動(dòng)力學(xué)選擇服藥后的zui適時(shí)間抽血檢測特性。用于傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標(biāo)志物和特種蛋白等的檢測的血清標(biāo)本的收集則沒有時(shí)間和體位方面的影響交流研討，只是在處理和保存方面要考慮以下幾個(gè)方面：

 （1）要注意避免出現(xiàn)嚴(yán)重溶血更加完善。血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán)，其有類似過氧化物的活性建設應用，因此支撐作用，在以HRP為標(biāo)記酶的ELISA測定中，如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高，則其就很容易在溫育過程中吸附于固相同時，從而與后面加入的HRP底物反應(yīng)顯色互動式宣講。

 （2）樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細(xì)菌污染，一則細(xì)菌的生長模式，其所分泌的一些酶可能會(huì)對抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用自動化；二則一些細(xì)菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會(huì)對用相應(yīng)酶作標(biāo)記的測定方法產(chǎn)生非特異性干擾。

 （3）血清標(biāo)本如是以無菌操作分離高品質，則可以在2～8℃下保存一周不折不扣，如為有菌操作，則建議冰凍保存資源優勢。樣本的長時(shí)間保存高效利用，應(yīng)在-70℃以下。

 （4）冰凍保存的血清標(biāo)本須注意避免因停電等造成的反復(fù)凍融估算。標(biāo)本的反復(fù)凍融所產(chǎn)生的機(jī)械剪切力將對標(biāo)本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用講理論，從而引起假陰性結(jié)果。此外不要畏懼，凍融標(biāo)本的混勻亦應(yīng)注意服務為一體，不要進(jìn)行劇烈振蕩，反復(fù)顛倒混勻即可逐漸顯現。

 （5）標(biāo)本在保存中如出現(xiàn)細(xì)菌污染所致的混濁或絮狀物時(shí)全會精神，應(yīng)離心沉淀后取上清檢測。

 試劑準(zhǔn)備

  在臨床實(shí)驗(yàn)室拓展基地，對試劑準(zhǔn)備一般不太注意先進技術，通常的做法是，在實(shí)驗(yàn)時(shí)將試劑從冰箱中拿出來即用說服力，而忽略了這種做法有可能影響后面溫育時(shí)間不夠的問題，其直接的后果是對一些弱陽性標(biāo)本的檢測出現(xiàn)假陰性分析。因此在ELISA測定中試劑的準(zhǔn)備zui為關(guān)鍵的是表示，在實(shí)驗(yàn)開始前，將試劑盒先從冰箱中拿出來非常激烈，在室溫下放置20分鐘以上后競爭力所在，再進(jìn)行測定，以使試劑盒在使用前與室溫平衡領域。這樣做的目的溝通機製，主要是為了在后面的溫育反應(yīng)步驟中，能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度能較快地達(dá)到所要求的高度註入新的動力，以滿足測定要求領先水平。其次，目前的商品ELISA試劑盒中的洗板液均需在實(shí)驗(yàn)室使用時(shí)對所提供的濃縮液稀釋配制，因此稀釋時(shí)所用的蒸餾水或去離子水應(yīng)保證質(zhì)量戰略布局。此外事關全面，當(dāng)試劑盒以O(shè)PD為底物時(shí)，則底物溶液應(yīng)在反應(yīng)顯色前臨時(shí)配制狀態。

 加血清樣本及反應(yīng)試劑

  在現(xiàn)在的ELISA商品試劑盒中技術節能，血清樣本的加入幾乎是*的要使用微量加樣器加入樣本的步驟。使用微量加樣器加樣必須注意的關(guān)鍵點(diǎn)是：加樣不可太快廣泛認同，要避免加在孔壁上部國際要求，不可濺出和產(chǎn)生氣泡。加樣太快鍛造，無法保證微量加樣的準(zhǔn)確性和均一性競爭激烈。加在孔壁上部的非包被區(qū)，易導(dǎo)致非特異吸附逐漸完善。濺出會(huì)對鄰近孔產(chǎn)生污染參與能力。出現(xiàn)氣泡則反應(yīng)液界面有差異。試劑的加入在國產(chǎn)試劑盒中基本上均是從滴瓶中滴加是目前主流，除了要注意滴加的角度外充分發揮，滴加的速度也很重要，滴加太快充分發揮，很容易出現(xiàn)重復(fù)滴加或加在兩孔之間的現(xiàn)象選擇適用，這樣就會(huì)在孔內(nèi)的非包被區(qū)出現(xiàn)非特異吸附，從而引起非特異顯色推動並實現。所以薄弱點，有時(shí)候一份標(biāo)本用相同的試劑盒這次測定為陽性，下次測定為陰性優化程度，往往就是上述加樣及試劑的錯(cuò)誤所致積極性。

 溫育

  溫育是ELISA測定中影響測定成敗zui為關(guān)鍵的一個(gè)因素。ELISA作為一種固相免疫測定不斷豐富，抗原抗體的結(jié)合反應(yīng)在固相上進(jìn)行實施體系，要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原*結(jié)合，必須在一定的溫度條件下反應(yīng)一定的時(shí)間各有優勢。溫育所需時(shí)間與溫度成反比效果較好，即溫度越高，則所需時(shí)間相對較短持續。zui為常用的溫育溫度有37℃和室溫等多個領域，其次是43℃和2～8℃。

  溫育這一步是臨床ELISA測定中zui容易出現(xiàn)問題的步驟產品和服務。通常目前國內(nèi)ELISA商品試劑盒的反應(yīng)溫育時(shí)間為37℃ 30分鐘～1小時(shí)應用擴展，進(jìn)口ELISA試劑盒則通常為37℃ 1～2小時(shí)才能有較*的結(jié)合，低于1小時(shí)，可能會(huì)影響測定下限進一步意見。因此增幅最大，關(guān)于溫育，在實(shí)際測定操作中一定要注意以下幾點(diǎn)：

  要保證在設(shè)定的溫度下有足夠的反應(yīng)時(shí)間生產能力。一般來說標準，加完樣本和/或反應(yīng)試劑后，將微孔板從室溫拿至水浴箱或溫箱中時(shí)堅持好，孔內(nèi)溫度從室溫升至37℃即將展開，需要一定的時(shí)間，尤其是在室溫比較低以及非水浴的狀態(tài)下特性，這段升溫時(shí)間可能還比較長傳承，而在臨床實(shí)驗(yàn)室中，很少有人注意這個(gè)問題建言直達，通常是將微孔板一放入溫箱即開始計(jì)時(shí)多種，這樣就很容易造成實(shí)際測定中溫育時(shí)間不夠，弱陽性樣本測不出來的問題充分發揮。曾有一地處南方的血站同行提出了一個(gè)問題發展成就，就是在每一年的冬季總有那么一個(gè)多月的時(shí)間，在做HBsAg測定的室內(nèi)質(zhì)控中能力建設，測定由衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心供應(yīng)的1 ng/ml弱陽性樣本時(shí)關註，總是測不出來，不知原因?yàn)楹螣o障礙？這可能就與南方冬天室內(nèi)溫度較低有關(guān)連日來，此時(shí)微孔板轉(zhuǎn)入溫箱后37℃溫育時(shí)間不夠，以致弱陽性樣本測定為陰性認為。因此系統，為保證37℃下足夠的溫育時(shí)間，臨床實(shí)驗(yàn)室可自行確定本實(shí)驗(yàn)室不同季節(jié)（不同室溫下）微孔板從室溫拿至溫箱后需要多長時(shí)間孔內(nèi)溫度才能達(dá)到37℃重要意義，從而適當(dāng)延長板條在溫箱中的放置時(shí)間形式。具體的做法是，用一小溫度計(jì)放置板孔反應(yīng)溶液中測量觀察即可不斷完善。

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