細胞轉(zhuǎn)染定義：將外源分子如DNA RNA等導(dǎo)入真核細胞的技術(shù)使用。

瞬時轉(zhuǎn)染：外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中相對較高，因此一個宿主細胞可存在多個拷貝數(shù)集中展示，產(chǎn)生高水平的表達模式，但通常只持續(xù)幾天參與能力，多用于啟動子和其他調(diào)控元件的分析合理需求。一般來說，超螺旋質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染效率較高充分發揮，在轉(zhuǎn)染后24-72h內(nèi)分析結(jié)果高質量，常常用到一些報告系統(tǒng)如熒光蛋白，β半乳糖苷酶等來幫助檢測選擇適用。

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染：外源DNA既可以整合到宿主染色體中管理，也可能作為一種游離體存在。盡管線性DNA比超螺旋DNA轉(zhuǎn)入量低但整合率高業務指導。外源DNA整合到染色體中概率很小改進措施，通常需要一些選擇性標記反復(fù)篩選得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的同源細胞系。

方法及特點:

化學(xué)法：磷酸鈣法長足發展、DEAE-右旋糖苷法今年、陽離子脂質(zhì)體法

物理法：電穿孔法、顯微注射法結構不合理、biolistic顆粒傳遞法

病毒介導(dǎo)法：逆轉(zhuǎn)錄病毒動手能力、腺病毒

陽離子脂質(zhì)體法：帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負電的磷酸基團形成復(fù)合物被細胞內(nèi)吞。過程如下圖：

特點：簡單通用銘記囑托，適用性廣引領，轉(zhuǎn)染效率高，重復(fù)性好示範，但轉(zhuǎn)染時需除血清應用前景，轉(zhuǎn)染效率隨細胞類型變化大。

脂質(zhì)體法由于脂質(zhì)體復(fù)合物與貼壁細胞的接觸機會遠大于懸浮細胞提供了有力支撐，所以貼壁比懸浮轉(zhuǎn)染效率要高激發創作。懸浮細胞建議使用電穿孔法。

電穿孔法：利用高壓電脈沖對細胞膜的干擾進一步意見，使其形成利于核酸進入的微孔增幅最大。

特點：需要特定儀器，適用性廣生產能力，除了質(zhì)粒外標準，還可轉(zhuǎn)染大的基因組示範推廣，細胞致死率高。

逆轉(zhuǎn)錄病毒（RNA）：通過病毒中膜糖蛋白和宿主細胞表面的受體相互作用進入宿主細胞即將展開，之后反轉(zhuǎn)錄酶啟動合成DNA并隨機整合到宿主基因組中大幅增加。

特點：穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，可用于難轉(zhuǎn)染的細胞傳承、原代細胞等特點，體內(nèi)細胞等，但攜帶基因不能太大多種。

腺病毒（雙鏈DNA）：先和細胞表面的受體結(jié)合將進一步，繼而在αV整合素介導(dǎo)下被細胞內(nèi)吞。

特點：可用于難轉(zhuǎn)染的細胞發展成就。

 轉(zhuǎn)染步驟：DAY-1  鋪板

                 DAY 0  DNA分子與復(fù)合物混合成就，轉(zhuǎn)染細胞

                 After  監(jiān)測轉(zhuǎn)染水平                                                                       

影響轉(zhuǎn)染的因素：

1、血清  血清影響復(fù)合物的形成互動式宣講，降低轉(zhuǎn)染效率

陽離子脂質(zhì)體和DNA的*量在使用血清時會有所不同效高性，因此想在轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中加入血清時要進行條件優(yōu)化。大部分細胞可以在無血清培養(yǎng)基中幾個小時內(nèi)保持健康自動化，對于對血清缺乏比較敏感的細胞提升，可以使用OPTI-MEM I培養(yǎng)基。對于對血清缺乏比較敏感的貼壁細胞不折不扣，建議使用LIPOFECTAMINE 2000支撐能力。

2、抗生素  比如青霉素和鏈霉素高效利用，是影響轉(zhuǎn)染的培養(yǎng)基添加物特征更加明顯。這些抗生素一般對于真核細胞無毒，但陽離子脂質(zhì)體試劑增加了細胞的通透性講理論，使抗生素可以進入細胞方便。這降低了細胞的活性，導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率低各領域。

3應用領域、細胞代數(shù)  轉(zhuǎn)染前細胞經(jīng)過1-2次傳代保證細胞生長旺盛容易轉(zhuǎn)染，注意貼壁細胞一旦長滿就不好轉(zhuǎn)染進行培訓。

4發展機遇、細胞鋪板密度  一般轉(zhuǎn)染時，貼壁細胞密度為70%-90%法治力量，懸浮細胞密度為2*10^6--4*10^6細胞/ml時效果較好全技術方案。確保轉(zhuǎn)染時細胞沒有長滿或處于靜止期。鋪板細胞數(shù)目的增加可以增加轉(zhuǎn)染活性和細胞產(chǎn)量。

5信息化、DNA質(zhì)量  DNA質(zhì)量對轉(zhuǎn)染效率影響非常大方式之一。一般的轉(zhuǎn)染技術(shù)基于電荷吸引原理，如果DNA不純非常激烈，如帶少量的鹽離子競爭力所在，蛋白引人註目，代謝物污染都會顯著影響轉(zhuǎn)染復(fù)合物的有效形成和轉(zhuǎn)染的進行領域。