細胞株通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標志物稱為細胞株設計標準。細胞株的特殊性質(zhì)或標志必須在整個培養(yǎng)期間始終存在增幅最大。如果不能繼續(xù)傳代或傳代數(shù)有限狀況，稱為有限細胞株數字技術；如果可以連續(xù)傳代特點，稱為連續(xù)細胞株能力建設。對于人類腫瘤細胞的方法，在體外培養(yǎng)半年以上，生長穩(wěn)定規定，并連續(xù)傳代的即可稱為連續(xù)性株或系環境。

　　細胞株的建株實例講解：

　　一、腫瘤細胞培養(yǎng)技術要點

　　1.取材：材料主要來源于外科手術或活檢瘤組織高質量，取材時避免用壞死組織相對簡便，要挑選瘤細胞集中和活力較好的部位，瘤性轉移淋巴結或胸腹水是較好的培養(yǎng)材料解決方案。取材后盡快培養(yǎng)趨勢，因故不能立即培養(yǎng)者，可凍存上高質量。其培養(yǎng)方法及凍存方法同前述正常組織。

　　2.成纖維細胞排除：在腫瘤組織中硰V度和深度；祀s有一些成纖維細胞深入交流，培養(yǎng)時能與瘤細胞同時生長引領作用，并常壓過癌細胞，導致癌細胞生長受阻以至消失臺上與臺下，應仔細排除用的舒心。

　　排除方法常有：機械刮除法、反復貼壁法集聚效應、消化排除法集成、膠原酶消化法等。

　　3.提高腫瘤細胞培養(yǎng)存活率和生長率

　　根據(jù)實驗經(jīng)驗互動講，腫瘤細胞在體外不易培養(yǎng)穩定性，建立能傳代的腫瘤細胞系更為困難。一般當腫瘤組成或細胞被原代培養(yǎng)后過程中，要經(jīng)過對新環(huán)境的適應才能生長去突破，因此不能局限于一般培養(yǎng)法，須采用一些特殊措施達到。如用適宜底物智能設備，鼠尾膠原底層及飼細胞底層等。用細胞生長因子蓬勃發展，根據(jù)細胞種類不同選用不同的促細胞生長因子特點，如胰島素、雌激素等重要性。也可以考慮動物媒介培養(yǎng)又進了一步。

　　二、人類淋巴母細胞建株方法

　　1.取4ml肝素抗凝血于離心管中記得牢，加入2ml RPMI 1640註入了新的力量。

　　2.混勻后沿管壁緩慢加到預置有4ml淋巴細胞分離液的液面上靜置30min。

　　3.1500rpm更多可能性，15min去創新，吸取白細胞層于另一離心管中。

　　4.加RPMI 1640 5ml洗滌白細胞兩次緊迫性。

　　5.將白細胞接種至1ml RPMI 1640培養(yǎng)基中結構，加入10μl環(huán)胞霉素和100μl的EB（EB病毒）液，混勻高效。

　　6.水浴搖床溝通協調，40次/分，37℃體系，3hr保障性。

　　7.1500rpm，15min責任製。將細胞接種至1ml培養(yǎng)基中（內(nèi)含谷氨酰胺1mM／ml）加入10μl環(huán)胞霉素十分落實，輕輕混勻倍增效應，37℃培養(yǎng)。

　　8.五天后觀察細胞轉化和生長情況製造業，決定是否半量換液優化服務策略。一般半量換液1-2次，并維持環(huán)胞霉素的濃度發展基礎。

　　9.待轉化細胞數(shù)量明顯上升兩個角度入手，并出現(xiàn)細胞團塊后，可轉入25ml細胞培養(yǎng)瓶中同期，加1-2ml培養(yǎng)基生產效率，37℃培養(yǎng)10-15天，一般每隔3-4天觀察一次科普活動，決定是否換液創新延展，傳代。

　　10.細胞生長達一定數(shù)量后凍存長期間，凍存前應進行核型分析和存檔基本情況。

上一篇 : 淺談腫瘤細胞的“復制”及可能引發(fā)的反應    下一篇 :  【展會回顧】第三屆現(xiàn)代臨床分子診斷論壇

>> 返回首頁