1. 冷凍管應(yīng)如何解凍開展面對面？

取出冷凍管后可能性更大， 須立即放入37 °C 水槽中快速解凍使用， 輕搖冷凍管使其在1 分鐘內(nèi)全部融化越來越重要的位置， 并注意水面不可超過冷凍管蓋沿使用， 否則易發(fā)生污染情形意向。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時(shí)應用擴展， 必須注意安全， 預(yù)防冷凍管之爆裂新型儲能。

 
2 細(xì)胞冷凍管解凍培養(yǎng)時(shí)有力扭轉， 是否應(yīng)馬上去除DMSO？
除少數(shù)特別注明對DMSO 敏感之細(xì)胞外一站式服務， 絕大部分細(xì)胞株（包括懸浮性細(xì)胞）廣度和深度， 在解凍之后， 應(yīng)直接放入含有10-15ml新鮮培養(yǎng)基之培養(yǎng)角瓶中管理， 待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO 即可顯示， 如此可避免大部分解凍后細(xì)胞無法生長或貼附之問題雙向互動。
 
3 可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基效率和安？
不能。每一細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細(xì)胞培養(yǎng)基品牌， 若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基深入開展， 細(xì)胞大都無法立即適應(yīng)更為一致， 造成細(xì)胞無法存活。
 
4 可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類技術的開發？
不能研究與應用。血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個(gè)極為重要的營養(yǎng)來源， 所以血清的種類和品質(zhì)對于細(xì)胞的生長會(huì)產(chǎn)生極大的影響更高效。來自不同物種的血清全面協議， 在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同，血清使用錯(cuò)誤常會(huì)造成細(xì)胞無法存活具體而言。
 
5 何謂FBS, FCS, CS, HS ?
FBS (fetal bovine serum) 和FCS (fetal calf serum) 是相同的意思工具， 兩者都是指胎牛血清， FCS 乃錯(cuò)誤的使用字眼喜愛， 請不要再使用重要的角色。CS (calf serum) 則是指小牛血清。HS (horseserum) 則是指馬血清向好態勢。
 
6 培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)應(yīng)使用5 % 或10% CO2平臺建設？或根本沒有影響？
一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作為pH 的緩沖系統(tǒng)貢獻力量， 而培養(yǎng)基中NaHCO3 的含量將決定細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用的CO2 濃度使用。當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3 含量為每公升3.7 g 時(shí)，細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用10 % CO2發行速度；當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3 為每公升1.5 g 時(shí)優化程度， 則應(yīng)使用5 % CO2 培養(yǎng)細(xì)胞。
 
7 何時(shí)須更換培養(yǎng)基奮勇向前？
視細(xì)胞生長密度而定多種場景， 或遵照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上之更換時(shí)間，按時(shí)更換培養(yǎng)基即可規劃。
 
8 培養(yǎng)基中是否須添加抗生素擴大公共數據？ 除于特殊篩選系統(tǒng)中外， 一般正常培養(yǎng)狀態(tài)下帶動擴大， 培養(yǎng)基中不應(yīng)添加任何抗生素核心技術體系。
 
9 附著性細(xì)胞繼代時(shí)所使用之trypsin-EDTA 濃度？應(yīng)如何處理持續發展？
一般使用之trypsin-EDTA 濃度為0.05% trypsin-0.53mMEDTA.4 Na必然趨勢。*次開瓶后應(yīng)立即少量分裝于無菌試管中， 保存于–20 °C擴大，避免反復(fù)冷凍解凍造成trypsin 之活性降低多樣性， 并可減少污染之機(jī)會(huì)。

10 懸浮性細(xì)胞應(yīng)如何繼代處理新格局？
一般僅需持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)角瓶中明顯， 稀釋細(xì)胞濃度即可安全鏈， 若培養(yǎng)液太多時(shí)， 可將培養(yǎng)角瓶口端稍微抬高創新為先， 直到無法容納為止真正做到。分瓶時(shí)取出一部份含細(xì)胞之培養(yǎng)液至另一新的培養(yǎng)角瓶， 加入新鮮培養(yǎng)基稀釋至適當(dāng)濃度創新延展， 重復(fù)前述步驟即可強化意識。
 
11 欲將一般動(dòng)物細(xì)胞離心下來，其離心速率應(yīng)為多少轉(zhuǎn)速基本情況？
欲回收動(dòng)物細(xì)胞的積極性， 其離心速率一般為300xg (約1,000rpm)，5 - 10 分鐘至關重要， 過高之轉(zhuǎn)速不久前， 將造成細(xì)胞死亡。
 
12 細(xì)胞之接種密度為何提升行動？ 依照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上之接種密度或稀釋分盤之比例接種即可能力建設。細(xì)胞數(shù)太少或稀釋的太多亦是造成細(xì)胞無法生長之一重要原因。
 
13 細(xì)胞冷凍培養(yǎng)基之成份為何研究進展？
動(dòng)物細(xì)胞冷凍保存時(shí)zui常使用的冷凍培養(yǎng)基是含5 - 10 %DMSO (dimethyl sulfoxide) 和90 - 95 % 原來細(xì)胞生長用之新鮮培養(yǎng)基均勻混合之無障礙。注意：由于DMSO 稀釋時(shí)會(huì)放出大量熱能， 故不可將DMSO 直接加入細(xì)胞液中廣泛關註， 必須使用前先行配制完成善於監督。
 
14 DMSO 之等級和無菌過濾之方式為何？
冷凍保存使用之DMSO 等級就能壓製， 必須為Tissue culture grade之DMSO (如Sigma D2650)更合理， 其本身即為無菌狀況， *次開瓶后應(yīng)立即少量分裝于無菌試管中更優美， 保存于4°C各方面， 避免反復(fù)冷凍解凍造成DMSO 之裂解而釋出有害物質(zhì)， 并可減少污染之機(jī)會(huì)成效與經驗。若要過濾DMSO適應性， 則須使用耐DMSO 之Nylon 材質(zhì)濾膜。
15 冷凍保存細(xì)胞之方法稍有不慎？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4 °C 30~60 分鐘→ (-20 °C30 分鐘*) → -80 °C 16~18 小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲(chǔ)存重要作用。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 °C 至–80 °C 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲(chǔ)存最為顯著。*-20 °C 不可超過1 小時(shí)尤為突出， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80°C 冰箱中改造層面，惟存活率稍微降低一些供給。
 
16 細(xì)胞欲冷凍保存時(shí)優勢與挑戰， 細(xì)胞冷凍管內(nèi)應(yīng)有多少細(xì)胞濃度經驗分享？
冷凍管內(nèi)細(xì)胞數(shù)目一般為1x106 cells/ml vial， 融合瘤細(xì)胞則以5x106 cells/ml vial 為宜趨勢。
 
17 應(yīng)如何避免細(xì)胞污染有力扭轉？ 細(xì)胞污染的種類可分成細(xì)菌、酵母菌一站式服務、霉菌廣度和深度、病毒和霉?jié){菌。主要的污染原因?yàn)闊o菌操作技術(shù)不當(dāng)引領作用、操作室環(huán)境不佳加強宣傳、污染之血清和污染之細(xì)胞等。嚴(yán)格之無菌操作技術(shù)用的舒心、清潔的環(huán)境技術發展、與品質(zhì)良好之細(xì)胞來源和培養(yǎng)基配制是減低污染之方法。
 
18 如果細(xì)胞發(fā)生微生物污染時(shí)前來體驗，應(yīng)如何處理自主研發？
直接滅菌后丟棄之。
 
19 支原體(mycoplasma) 污染的細(xì)胞更加廣闊， 是否能以肉眼觀察出異狀損耗？
不能。除極有經(jīng)驗(yàn)之專家外非常完善，大多數(shù)遭受支原體污染的細(xì)胞株性能穩定，無法以其外觀分辨之。
 
20 支原體污染會(huì)對細(xì)胞培養(yǎng)有何影響作用？
支原體污染幾乎可影響所有細(xì)胞之生長參數(shù)越來越重要， 代謝及研究之任一數(shù)據(jù)。故進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前發揮重要作用，必須確認(rèn)細(xì)胞為mycoplasma-free醒悟，實(shí)驗(yàn)結(jié)果之?dāng)?shù)據(jù)方有意義。
 
21 偵測出細(xì)胞株有支原體污染時(shí)高質量， 該如何處理也逐步提升？
直接滅菌后丟棄，以避免污染其它細(xì)胞株註入了新的力量。
 
22 CO2 培養(yǎng)箱之水盤如何保持清潔重要的作用？
定期(至少每兩周一次) 以無菌蒸餾水或無菌去離子水更換之。
 
23 為何培養(yǎng)基保存于4 °C 冰箱中， 顏色會(huì)偏暗紅色足夠的實力， 且pH值會(huì)越來越偏堿性緊迫性？
培養(yǎng)基保存于4 °C 冰箱中， 培養(yǎng)基內(nèi)之CO2 會(huì)逐漸溢出更適合，造成培養(yǎng)基越來越偏堿性高效。而培養(yǎng)基中之酸堿指示劑(通常為phenol red) 的顏色也會(huì)隨堿性增加而更偏暗紅。培養(yǎng)基偏堿之結(jié)果要素配置改革， 將造成細(xì)胞生長停滯或死亡體系。若培養(yǎng)基偏堿時(shí)， 可以通入無菌過濾之CO2帶動產業發展， 以調(diào)整pH 值責任製。
 
24 各種細(xì)胞培養(yǎng)用的dish，flask是否均相同倍增效應？
不同廠牌的dish 或flask有序推進， 其所coating 的polymer 不同， 制造程序亦不同需求， 雖對大部分細(xì)胞沒有太大之影響堅定不移， 惟少數(shù)細(xì)胞則可能因使用廠牌不同之dish 或flask 而有顯著之生長差異。
 
25 購買之細(xì)胞冷凍管經(jīng)解凍后真諦所在，為何會(huì)發(fā)生細(xì)胞數(shù)目太少之情形指導？
研究人員在冷凍細(xì)胞之培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)細(xì)胞數(shù)目太少， 大都是因?yàn)殡x心過程操作上的失誤充分， 造成細(xì)胞的物理性損傷進一步完善， 以及細(xì)胞流失。建議細(xì)胞解凍后不要立刻離心競爭力， 應(yīng)待細(xì)胞生長隔夜后再更換培養(yǎng)基即可調整推進。
 
26 購買之細(xì)胞死亡或細(xì)胞存活率不佳可能原因？
研究人員在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)存活率不佳機製性梗阻， 常見原因可歸納為：培養(yǎng)基使用錯(cuò)誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳機製。血清使用錯(cuò)誤或血清的品質(zhì)不佳。解凍過程錯(cuò)誤集成應用。冷凍細(xì)胞解凍后探討， 加以洗滌細(xì)胞和離心。懸浮細(xì)胞誤認(rèn)為死細(xì)胞高效流通。培養(yǎng)溫度使用錯(cuò)誤調解製度。細(xì)胞置于–80 °C 太久。
 
27 收到之冷凍管瓶身破裂功能，瓶蓋有裂紋應用的因素之一，或瓶蓋脫落之原因解決？
冷凍管瓶蓋裂紋，或瓶身破裂敢於監督，可能是因?yàn)椴僮髡邐A取冷凍管時(shí)用力不當(dāng)幅度，造成冷凍管裂損，建議使用止血鉗小心夾取重要的作用。另冷凍管瓶蓋松動(dòng)或松脫貢獻，乃因熱脹冷縮之物理現(xiàn)象，冷凍管有可能因此而造成細(xì)胞污染各方面，故冷凍管于放入和取出液氮桶時(shí)防控，均應(yīng)立刻將冷凍管再一次扭緊優勢。